Calculation Of Fluorescence Polarization Parameters - tecan infinite 200 Instructions For Use Manual

6.4.8

Calculation of Fluorescence Polarization Parameters

2008-07
G-Factor:
cross
+ −
1 ( P )( RFU RFU
ref
ref
=
G
par
− −
1 ( P )( RFU RFU
ref
ref
P ... Polarizati on value of
ref
RFU ... Averaged relative
ref
RFU ... Averaged relative
buf
Blank Reduction:
The mean value of the respective blank wells is subtracted from each value.
⎧
par −
RFU RFU
⎪
ref
⎪
par −
RFU RFU
Δ par =
RFU buf
⎨
par −
⎪
RFU RFU
smp
⎪
−
par
RFU RFU
⎩
blk
⎧
−
cross
RFU RFU
⎪
ref
⎪
cross −
RFU RFU
Δ =
cross
RFU buf
⎨
−
cross
⎪ RFU RFU
smp
⎪
−
cross
RFU RFU
⎩
blk
Intensities:
Parallel and perpendicular intensities are calculated using the following formulas:
= Δ
par par
I G * RFU
cross = Δ cross
I RFU
Polarization:
par − cross
I I
=
P
+
par cross
I I
Anisotropy:
par − cross
I I
=
A
+
par cross
I 2 * I
Total Intensity:
= +
par cross
I I 2 * I
tot
Instructions for Use for infinite® 200 No. 30017581 Rev. No. 1.4
6. Operating the infinite® 200
cross
)
buf
par
)
buf
[ ]
reference P
fluorescen ce units of reference
fluorescen ce units of buffer
par
buf
par
buf
for each well
par
blk
par
blk
cross
buf
cross
buf
for each well
cross
blk
cross
blk
107