COOK Medical IVF Media Instructions For Use Manual page 88

• Centrifugez pendant 10 minutes à 600 G.
• Répétez l'étape du lavage dans 3 mL supplémentaires de solution tampon de lavage des
gamètes (K-SIGB).
• Retirez le surnageant et remettez en suspension le culot dans un faible volume
(approximativement 200 μL) de milieu de culture pour spermatozoïdes (K-SISM) ou de milieu
de fécondation (K-SIFM).
• Comptez les spermatozoïdes et calculez la concentration. Ajustez selon les besoins.
• Conservez dans un incubateur à 6 % de CO
SPERMIENT SYDNEY IVF K SISP 20 ET K SISP 100
UTILISATION
Le milieu Spermient est employé pour séparer le sperme en fonction de sa densité, par le biais
de solutions à gradient de densité.
GÉNÉRALITÉS
Le milieu Spermient est additionné d'albumine sérique humaine (10 mg/mL) et de gentamicine
(0,01 mg/mL).
Prête à l'emploi après équilibrage à 37 °C.
STOCKAGE ET STABILITÉ
Le milieu Spermient doit être conservé dans son contenant d'origine non ouvert, réfrigéré à une
température de 2 à 8 °C. Il ne doit pas être congelé.
DIRECTIVES D'UTILISATION
• Utilisez une technique aseptique.
• Le sperme doit être utilisé dans l'heure qui suit sa collecte.
• Le milieu Spermient doit être dilué avec la solution tampon de lavage des gamètes (K-SIGB), à une
concentration adaptée à la préparation du sperme (par exemple, des gradients de 40 % et 80 %).
• Les gradients doivent être préparés juste avant leur utilisation.
• Le sperme brut ne doit jamais être centrifugé.
• Laissez le sperme se liquéfier à 37 °C pendant 30 minutes.
• Chauffez le Spermient à 37 °C pendant 4 heures minimum avant utilisation.
• Préparez deux gradients en ajoutant 1,5 mL de solution à 40 % sur 1,5 mL de solution à 80 %
dans des tubes à fond conique.
• Chargez 60 %, ou jusqu'à 2,0 mL, de l'éjaculat sur un gradient et 40 %, ou jusqu'à 1,2 mL, sur
l'autre gradient.
• Centrifugez pendant 20 minutes à 300 G puis retirez avec précaution le plasma séminal, l'interface
supérieure, la couche de 40 % et l'interface inférieure. Laissez les 80 % restants intacts.
• Récupérez le culot de sperme à l'aide d'une pipette Pasteur propre et remettez-le en
suspension dans 3 mL de solution tampon de lavage des gamètes (K-SIGB).
• Centrifugez pendant 10 minutes à 600 G.
• Répétez l'étape du lavage dans 3 mL supplémentaires de solution tampon de lavage des
gamètes (K-SIGB).
• Retirez le surnageant et remettez en suspension le culot dans un faible volume
(approximativement 200 μL) de milieu de culture pour spermatozoïdes (K-SISM) ou de milieu
de fécondation (K-SIFM).
• Comptez les spermatozoïdes et calculez la concentration. Ajustez selon les besoins.
• Conservez dans un incubateur à 6 % de CO
à 37 °C jusqu'à la prochaine utilisation.
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à 37 °C jusqu'à la prochaine utilisation.
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