COOK Medical IVF Media Instructions For Use Manual page 105

INFORMAZIONI GENERALI
Il kit di riscaldamento blastocisti è composto da tre mezzi tamponati con HEPES da utilizzare
sequenzialmente. Le soluzioni di riscaldamento sono addizionate di albumina sierica umana
(fino a 20,0 mg/mL) e gentamicina (0,01 mg/mL).
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
I tre mezzi sono tutti basati sulla formulazione del buffer Cryobase, un mezzo tamponato
con 10 mM di HEPES contenente 20,0 mg/mL di albumina sierica umana e 0,01 mg/mL di
gentamicina. La soluzione 1 è il primo mezzo usato nel processo di scongelamento e contiene
buffer Cryobase con 0,33 M di trealosio. La soluzione 2 contiene buffer Cryobase con 0,2 M di
trealosio. La soluzione 3 serve per il recupero e contiene solo buffer Cryobase.
CONSERVAZIONE E STABILITÀ
Il kit di riscaldamento blastocisti deve essere conservato in frigorifero a 2-8 °C nel suo
contenitore originale sigillato.
MODALITÀ D'IMPIEGO
Preparazione
• Adottare una tecnica asettica.
• Prima dell'uso equilibrare le tre soluzioni di riscaldamento a 37 °C.
• Preparare un volume adeguato di mezzo per blastocisti (K-SIBM) in un'incubatrice a
6% di CO a 37 °C prima dell'uso, per la coltura della blastocisti dopo il riscaldamento.
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Metodica
• Identificare il dispositivo (o dispositivi) di vitrificazione da riscaldare e riscaldarlo(i) secondo
le istruzioni del fabbricante.
• Preparare le soluzioni di riscaldamento in una piastra a 4 pozzetti aggiungendo 800 μL di
soluzione di riscaldamento 1 nei pozzetti 1 e 2, 800 μL di soluzione di riscaldamento 2 nel
pozzetto 3 e 800 μL di soluzione di riscaldamento 3 nel pozzetto 4.
• Estrarre immediatamente l'embrione dal dispositivo di vitrificazione e depositarlo nel
pozzetto 1; AGITARE IMMEDIATAMENTE fino a dissolvere la microsfera.
• Con una pipetta trasferire l'embrione nel pozzetto 2 per 5 minuti.
• Spostarlo nel pozzetto 3 per 5 minuti. Lavare accuratamente l'embrione.
• Spostarlo nel pozzetto 4 per 5 minuti. Lavare accuratamente l'embrione.
• Deporre l'embrione sulla piastra contenente il mezzo per blastocisti (K-SIBM) equilibrato,
pronto per l'hatching.
• Se necessario, eseguire l'hatching dell'embrione (preferibilmente con il metodo a laser)
e passare a una nuova microgoccia di mezzo per blastocisti (K-SIBM) equilibrato.
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