COOK Medical IVF Media Instructions For Use Manual page 46

• Den Überstand entfernen und das Pellet in einer kleinen Menge (etwa 200 μL)
Spermienmedium (K-SISM) oder Befruchtungsmedium (K-SIFM) resuspendieren.
• Die Spermien zählen und die Konzentration berechnen. Je nach Bedarf korrigieren.
• Bis zum Gebrauch in einem Inkubator bei 6% CO
SYDNEY IVF SPERMIENT, K SISP 20 UND K SISP 100
VERWENDUNGSZWECK
Spermient dient zur Trennung von Spermien auf der Basis ihrer Dichte unter Verwendung von
Dichtegradienten-Lösungen.
ALLGEMEINES
Spermient ist mit humanem Serumalbumin (10 mg/mL) und Gentamicin (0,01 mg/mL)
angereichert.
Gebrauchsfertig nach Äquilibrieren auf 37 °C.
LAGERUNG UND STABILITÄT
Spermient muss im ungeöffneten Originalbehälter bei 2-8 °C gekühlt gelagert werden.
Nicht einfrieren.
GEBRAUCHSANWEISUNG
• Aseptische Technik anwenden.
• Sperma sollte innerhalb von einer Stunde nach der Entnahme aufbereitet werden.
• Spermient muss mit Gametenpuffer (K-SIGB) auf eine geeignete Konzentration für die
Spermienaufbereitung (z.B. 40%- und 80%-Gradienten) verdünnt werden.
• Die Gradienten sollten unmittelbar vor Gebrauch hergestellt werden.
• Unaufbereitetes Sperma zu keiner Zeit zentrifugieren.
• Das Sperma 30 Minuten bei 37 °C sich verflüssigen lassen.
• Spermient vor Gebrauch mindestens vier Stunden auf 37 °C erwärmen.
• Zwei Gradienten herstellen: 1,5 mL der 40%igen Lösung über 1,5 mL der 80%igen Lösung in
Röhrchen mit konischem Boden schichten.
• 60% bzw. bis zu 2,0 mL der Samenflüssigkeit auf einen Gradienten und 40% bzw. bis zu
1,2 mL auf den anderen Gradienten auftragen.
• 20 Minuten bei 300 G zentrifugieren; anschließend das Samenplasma, die obere
Grenzschicht, die 40%-Schicht und die untere Grenzschicht vorsichtig entfernen. Den Rest
der 80%-Schicht unberührt lassen.
• Das Spermienpellet mit einer sauberen Pasteur-Pipette abnehmen und in 3 mL
Gametenpuffer (K-SIGB) resuspendieren.
• 10 Minuten bei 600 G zentrifugieren.
• Den Waschschritt in weiteren 3 mL Gametenpuffer (K-SIGB) wiederholen.
• Den Überstand entfernen und das Pellet in einer kleinen Menge (etwa 200 μL)
Spermienmedium (K-SISM) oder Befruchtungsmedium (K-SIFM) resuspendieren.
• Die Spermien zählen und die Konzentration berechnen. Je nach Bedarf korrigieren.
• Bis zum Gebrauch in einem Inkubator bei 6% CO
und 37 °C aufbewahren.
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und 37 °C aufbewahren.
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