COOK Medical IVF Media Instructions For Use Manual page 150

• Подготовьте два градиента в конических пробирках, поместив 1,5 мл 80% раствора под
слой 1,5 мл 40% раствора.
• Добавьте 60% объема эякулята (или до 2,0 мл) в пробирку с одним градиентом и 40%
объема (или до 1,2 мл) в пробирку с другим градиентом.
• Центрифугируйте в течение 20 минут с ускорением 300 G, затем осторожно извлеките
семенную жидкость, верхнюю границу раздела, слой 40% раствора и нижнюю границу
раздела. Оставьте в пробирке нетронутый остаток слоя 80% раствора.
• Отберите осадок спермы чистой пастеровской пипеткой и ресуспендируйте его в 3 мл
буфера для гамет (K-SIGB).
• Центрифугируйте в течение 10 минут с ускорением 600 G.
• Повторите этап отмывки, вновь добавив 3 мл буфера для гамет (K-SIGB).
• Удалите надосадочную жидкость и ресуспендируйте осадок в небольшом объеме (около
200 мкл) среды для сперматозоидов (K-SISM) или среды для оплодотворения (K-SIFM).
• Выполните микроскопию образца спермы и рассчитайте концентрацию
сперматозоидов. При необходимости откорректируйте концентрацию.
• До использования храните в инкубаторе с газовой средой, содержащей 6% CO
температуре 37 °C.
СРЕДА ДЛЯ СПЕРМАТОЗОИДОВ SYDNEY IVF K SISM 20,
K SISM 50 И K SISM 100
НАЗНАЧЕНИЕ
Среда для сперматозоидов предназначена для использования в процедурах
экстракорпорального оплодотворения при обработке сперматозоидов.
ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ
Среда для сперматозоидов содержит сывороточный альбумин человека (10 мг/мл) и
гентамицин (0,01 мг/мл).
Среда для сперматозоидов готова к использованию после уравновешивания в газовой
среде с 6% CO до температуры 37 °C.
2
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ
Среда для сперматозоидов должна храниться в оригинальном невскрытом контейнере в
холодильнике при температуре 2–8 °C. Не замораживать.
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
• Соблюдайте правила асептики.
• Образец спермы должен быть обработан в пределах одного часа после сбора.
• В течение не менее 4 часов перед использованием выполните уравновешивание среды
для сперматозоидов в инкубаторе с газовой средой, содержащей 6% CO
температуры 37 °C.
• Выдержите образец спермы в течение 30 минут при температуре 37 °C для его разжижения.
• Аккуратно добавьте аликвоты (100–300 мкл) полностью разжиженной спермы под слой
уравновешенной среды для сперматозоидов (объемом 0,5 мл), находящейся в 5 мл
пробирке с круглым дном.
• Установите пробирки в штатив для пробирок под углом 60° к горизонтали. Поместите
штатив в CO -инкубатор.
2
• Извлеките штатив из инкубатора через 20–60 минут и удалите слой среды, находящийся
над спермой (около 0,25 мл).
150
, при
2
, до
2