Leica TCS SP8 SMD User Manual page 11

17.12.2 Running IRF Measurement . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .174
17.13 Remarks . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
17.13.1 Ad-hoc-Inspection of a Specimen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
17.13.2 Bidirectional Scanning . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
17.13.3 Setting the Laser Intensity of the Diode Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
17.13.4 Sensitivity of the Fluorescence Detection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
17.13.5 Optimum Lifetime Information . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .176
18 F(L)CS Data Acquisition . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177
18.1 Preparing the FCS Measurement . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177
18.1.1 Selecting an Objective . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .177
18.1.2 Calibrating the Positioning Accuracy of the FCS Measuring Point . . . . . . . . .177
18.1.3 Testing the Positioning Accuracy . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .181
18.1.4 Adjusting the Correction Ring on the Objective . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183
18.1.5 Setting the Reference Position . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .186
18.1.6 Acquiring a Reference Image . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .186
18.1.6.1 Image Acquisition Using Photomultipliers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .187
18.1.6.2 Image Acquisition with PE APDs (AQR Type) or MPD APDs
(PDM Type) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .188
18.2 Setup Imaging Step - Image Acquisition. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .190
18.2.1 Selecting Detectors for the Image Acquisition. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .190
18.2.1.1 Photomultiplier (PMT) / Internal Hybrid Detector (HyD) . . . . . . . . . . . . . . .190
18.2.1.2 PE / MPD APDs . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .190
18.2.2 Selecting Laser Lines as an Excitation Source for the Image Acquisition. . .191
18.2.2.1 Using Continuous Wave Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .191
18.2.2.2 Using MP Lasers. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .192
18.2.2.3 Using Pulsed VIS Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .192
18.2.2.4 Using a Pulsed UV Laser . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .193
18.2.2.5 Using White Light Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .194
18.2.3 Adjusting the Pinhole for Image Acquisition . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .194
18.3 Setup FCS Step - Optimizing FCS Measurement Conditions . . . . . . . . . . . . . . . . .195
18.3.1 Selecting APDs. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .195
18.3.2 Selecting Laser Lines for FCS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .195
18.3.2.1 Using Continuous Wave VIS Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .195
18.3.2.2 Using Pulsed VIS Diode Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .196
18.3.2.3 Using White Light Lasers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .197
18.3.3 Fluorifier Disc . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .197
18.3.4 Setting the Pinhole. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .197
18.3.5 Optimizing FCS Settings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .198
18.3.6 Count Rate Monitor . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .199
18.3.7 Loading and Saving FCS-specific Instrument Parameter Settings . . . . . . . . .200
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