Lade- Oder Probenpuffer; Längenstandards; Troubleshooting - VWR Peqlab PerfectBlue Mini S Instruction Manual

Bedienungsanleitung PerfectBlue Horizontale Minigelsysteme
TM

Lade- oder Probenpuffer

Die zu analysierenden Proben werden vor dem Auftragen auf das Gel mit einem geeigneten Ladepuffer
vermischt. Ladepuffer enthalten Farbstoffe zur Sichtbarmachung des Migrationsfortschrittes sowie
Glycerol o. Ä., damit die Proben schwerer als der Elektrophoresepuffer werden und in die Geltaschen
sinken. Die verwendeten Farbstoffe sind wie die Nukleinsäuren negativ geladen und wandern wie diese
zur Anode. Dabei komigriert Bromphenolblau in 0.5 x TBE-Gelen mit 300 bp DNA-Fragmenten und
Xylencyanol in etwa mit 4 kbp DNA-Fragmenten.
6 x DNA-Ladepuffer: 0.25 % (w/v) Bromphenolblau
0.25 % (w/v) Xylencyanol FF
30 % (v/v) Glycerol
Längenstandards
Längenstandards oder 'Marker' werden auf jedem Gel aufgetragen, um die Auftrennung zu kontrollie-
ren und um eine Größenbestimmung der Proben vornehmen zu können. Wird eine spezifische Konzent-
ration eines bekannten Markers aufgetragen, kann auch die DNA-Menge einer Bande bestimmt wer-
den. Größenmarker bestehen z. B. aus entsprechend verdauter Plasmid-DNA mit Fragmenten bekannter
Größe. VWR bietet eine Vielzahl an DNA- und RNA-Markern an. Informationen hierzu finden Sie in
unserem aktuellen Produktkatalog oder unter www.de.vwr.com.

TROUBLESHOOTING

Hier finden Sie passende Lösungen zu möglichen Problemen. Sollten Sie weitere Fragen haben, wird
Ihnen das VWR-Service-Team gerne weiterhelfen (TECHNISCHER SERVICE & BESTELLINFOR-
MATIONEN).
Problem: Agarose läuft beim Gießen aus.
Überprüfen Sie den festen Sitz der Gummidichtungen um den Gelträger und dessen Sitz in der Gieß-
schiene. Setzen Sie die Gummidichtungen nach eventueller Reinigung mit warmem Wasser erneut fest
ein. Achten Sie dabei auf ein gleichmäßiges Einsetzen der Gummidichtungen in die Aussparungen des
Gelträgers.
Problem: Bandenmuster ist verzerrt; Banden laufen nicht gerade ('Smiling Effekt').
Stellen Sie sicher, dass das Gel auf einer geraden Unterlage gegossen wird und der Gelträger eben in
der Pufferkammer sitzt. Möglicherweise wird eine zu hohe Spannung verwendet. Verringern Sie die
Spannung. Evtl. wurde der Elektrophoresepuffer falsch oder mit zu alten Chemikalien angesetzt. Evtl.
wurde vergessen zum Ansetzen der Gellösung Elektrophoresepuffer zu verwenden. Evtl. wurde die kon-
zentrierte Stammlösung des Elektrophoresepuffers zur Herstellung der Arbeitslösung nicht oder falsch
verdünnt.
Problem: Proben laufen in bestimmten Bereichen des Gels ungleichmäßig.
Überprüfen Sie, ob die Platinelektroden intakt sind und über die gesamte Länge gleichmäßig Strom ab-
geben. Dies zeigt sich durch Blasenbildung an den Elektroden, bis zur Verbindung am Bananenstecker.
Sollte eine Elektrode gerissen sein, kontaktieren Sie bitte umgehend das VWR Service-Team. Evtl. wur-
den die Gele wiederholt mit zu heißer Agaroselösung (> 60 °C) gegossen. Die Gellösung sollte immer
auf unter 60 °C abgekühlt werden, um den Gelträger nicht zu verformen und die Kammer nicht zu be-
schädigen. Ein verformter Gelträger führt zu ungleichmäßig gegossenen Gelen und daraus resultieren-
der schlechter Auftrennung.
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