Beladen Des Gels Und Elektrophorese - VWR Peqlab PerfectBlue Mini S Instruction Manual

Bedienungsanleitung PerfectBlue

Beladen des Gels und Elektrophorese

1. Sobald das Gel vollständig fest ist, kann der Gelträger für den Gellauf passend eingesetzt werden,
d.h. wie oben beschrieben herausgenommen und um 90 ° versetzt wieder in die Pufferkammer ein-
gesetzt werden, so dass die offenen Enden des Gelträgers zu den Pufferreservoiren gerichtet sind.
2. Füllen Sie nun so viel Elektrophoresepuffer in beide Pufferreservoire der Kammer bis das Gel kom-
plett mit ca. 3 mm Puffer überschichtet ist; maximal aber bis zur Markierung 'Fill Line', die auf jeder
Pufferkammer zu finden ist. Eine ungefähre Angabe der dazu benötigten Puffervolumina finden Sie
unter 'SYSTEMÜBERBLICK/Technische Merkmale'. Zu wenig Puffer kann zum Austrocknen des Gels
während des Laufs führen, wogegen zu viel Puffer eine verminderte Migrationsgeschwindigkeit, er-
höhte Wärmeentwicklung und ein verzerrtes Bandenmuster zur Folge haben kann.
3. Entfernen Sie die Kämme vorsichtig aus dem Gel, ohne die Taschen zu beschädigen, indem Sie sie
zum Lockern leicht hin- und herbewegen und dann gerade nach oben herausziehen.
4. Beladen Sie die Taschen nun mit den vorbereiteten Proben. Die Proben sollten mit einem entspre-
chenden Ladepuffer versetzt sein, damit sie gleichmäßig in die Taschen einsinken und der Fortschritt
des Gellaufs verfolgt werden kann. Angaben zum ungefähren Taschenvolumen finden Sie unter
'TECHNISCHER SERVICE & BESTELLINFORMATIONEN'. Falls Mikrotiterkämme verwendet wurden,
können die Taschen unter Verwendung einer Mehrkanalpipette beladen werden. Bis zu einer
Zahnzahl von 26 können die Taschen der Minigel-Mikrotiterkämme 'direkt' beladen werden, d. h.
die Pipettenspitzen passen fortlaufend in die Geltaschen.
Anmerkung: Auf jedem Gel sollte eine Probe eines definierten Molmassen- bzw. Längenstandards
aufgetragen werden, um eine Größen- und ggf. Konzentrationsbestimmung der zu analysierenden
Probe zu ermöglichen.
5. Schieben Sie den Sicherheitsdeckel mit den angeschlossenen Stromkabeln seitlich bis zum Anschlag
auf die Pufferkammer, wodurch es zu einem vollständig abgeschirmten elektrischen Kontakt zwi-
schen den entsprechenden Anschlüssen des Kammerdeckels und der Pufferkammer kommt. Die En-
den der Stromkabel (4 mm, male) werden nun an eine geeignete Gleichstrom-Spannungsquelle
(Power Supply) angeschlossen.
Bitte achten Sie dabei auf die richtige Polung. Zur Erinnerung: Nukleinsäuren sind in alkalischem bis
neutralem Milieu negativ geladen und wandern zur Anode, der positiven Elektrode. Der allgemeine
Farbcode für positiv geladene Elektroden ist ROT.
6. Schalten Sie den Power Supply an und führen Sie den Gellauf bei einer angemessenen elektrischen
Spannung durch (siehe 'SYSTEMÜBERBLICK/Technische Merkmale'). Beobachten Sie den Fortschritt
der Migration anhand der Farbstoffbande des Ladepuffers, um ein Herauslaufen der Proben aus
dem Gel bzw. in ein anderes Probenfeld hinein zu vermeiden. Dabei ist zu berücksichtigen, dass in
0.5 x TBE-Gelen Bromphenolblau mit 300 bp DNA-Fragmenten und Xylencyanol in etwa mit 4 kbp
DNA-Fragmenten komigriert.
VWR_v0617_D
Horizontale Minigelsysteme
TM
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