中文 (Chinese) - Merck Millipore Auto2D Plus Quick Start Manual

中文 (Chinese)
预期用途
Auto2D 电泳设备使2D电泳过程完全自动化， 基于等电点
®
和分子量来分离蛋白质。 它只需一个多小时即可完成蛋白
质的完全分离。
目录
Auto2D 电泳设备
®
•
电源线：
•
适用于日本和北美的电源线
•
适用于日本和北美的3P-2P转换插头
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适用于欧洲的电源线
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适用于中国的电源线
•
适用于英国的电源线
•
还需要 （未包含） ：
有关产品货号， 请参见第52页的 "产品订购" 部分。
Auto2D 电极芯片Plus型
®
•
Auto2D PAGE芯片
®
•
Auto2D IEF芯片
®
•
Auto2D 溶液芯片Plus型
®
•
Auto2D 三-甘氨酸 （Tris-Glycine） 或三-三羟甲基甘
®
•
氨酸 （Tris-Tricine） 试剂盒
两性电解质 （根据IEF芯片的pH范围选择合适的两
•
性电解质）
蒸馏水
•
滤纸， 0.3 mm厚
•
网上用户指南
「ユーザーズガイド」 の完全版包括的な詳細説明とレシ
ピ。 可以从SigmaAldrich.com的Auto2D 设备产品页
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面下载。
储存方法和稳定性
Auto2D 设备应仅在室内使用/存放。 有关存放要求，
®
请参见每个部件的产品标签。
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注意事项
Y Y
仅供研究使用。
在使用本产品之前， 请仔细阅读 《安全表》 （ 随附） 以及
SigmaAldrich.com上的完整版 《用户指南》 。
Auto2D Plus工作流程
®
整个过程： 66–138分钟 （取决于配方）
制备样品
涂抹试剂
凝胶复水 3分钟
样品上样至凝胶 10分钟
第一维度： 等电聚焦 17分钟
SDS平衡 3分钟
第二维度： SDS-PAGE 33分钟
检测
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制备
试剂
1. 按照试剂盒随附的文件或完整版 《用户指南》
（网上） 中的说明制备和存放试剂盒。
2. 让以下低温储存的产品平衡至室温 （20–25°C约
10分钟） 。
IEF芯片
•
PAGE芯片
•
复水溶液
•
DTT溶液
•
两性电解质
•
3. 制备用于IEF芯片复水以及蛋白质样品提取/稀释
的工作复水溶液：
试剂
复水溶液
DTT溶液 (1M)
两性电解质
*
总计
根据要使用的IEF芯片的范围选择两性电解质。
*
对于原液浓度为40％的两性电解质， 添加1 µL。
对于100X的两性电解质， 添加2 µL。
4. 在SDS-PAGE之前， 制备工作平衡缓冲液以平衡
聚焦蛋白质。
试剂
平衡缓冲液预
混液
DTT溶液 (1M)
总计
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样品制备
将蛋白质样品溶解于按照步骤3制备的工作复水溶液中。
可以用工作复水溶液将样品稀释2倍或更多倍， 以达到想
要的蛋白质浓度， 并降低盐浓度。
盐浓度过高会影响等电聚焦过程中的蛋白质分离， 并造
成电流超过100 µA。 高盐浓度的样品应通过以下方法
之一脱盐：
TCA /丙酮沉淀， 然后将蛋白质在工作复水溶液中
重悬
或者
使用旋转柱进行缓冲液交换
或者
使用Auto2D
请参见完整版的网上 《用户指南》 。 ）
说明： 在蛋白质重悬过程中， 避免将蛋白质加热到37°C
浓度
体积 最终
以上。
189 µL
量化蛋白质。 可以加载0.1–100 µg的蛋白质进行2D电
10 µL 50 mM
泳。 最佳蛋白质量取决于检测方法和样品复杂性。 应将
1–2 µL 0.5–1% v/v 以下蛋白质量作为起点， 用户可能需要优化其特定样品
的上样量。
200 µL
考马斯亮蓝染色： 50 µg
•
荧光染色： 10 µg
•
银染： 5 µg
•
荧光预标记： 3 µg
•
使用加载到溶液芯片中的蛋白质数量来确定是使用S
浓度
（小） 、 M （中） 还是L （ 大） 配方类型来进行蛋白质分离，
体积 最终
应用于设备的样品量为13–15 µL。 必要时， 可用工作复
760 µL
水溶液稀释样品。
40 µL 50 mM
接通Auto2D
800 µL
选择与您所在国家/地区的电源插座兼容的适当电源线
（设备随附） 。 将匹配的一端牢固地插入Auto2D
背面， 将另一端牢固地插入电源插座。
电源开关位于Auto2D
向上按开关打开电源。
应用程序将自动启动。 在屏幕上， 选择Auto2D
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设备执行脱盐流程 （有关更多信息，
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设备的电源
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设备的
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设备背面的交流插口旁边。
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Plus型。
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