Merck Millipore Auto2D Plus Quick Start Manual page 20

準備
試薬
1. 試薬キッ トの調製を、 キッ ト同梱の文書または
完全版のユーザーガイド （オンライン） に従って
行います。
2. 低温で保管されている下記の製品を室温になじま
せます （20～25°C、 約10分間） 。
• IEF Chip
• PAGE Chip
• Rehydration Solution
• DTT Solution
• アンフ ォライ ト
3. タンパク質試料の抽出/希釈およびIEF Chipの膨
潤のためのワーキングRehydration solutionを
調製します。
試薬 体積 最終濃度
Rehydration
189 µL
Solution
DTT Solution
10 µL 50 mM
(1M)
アンフ ォライ ト* 1～2 µL 0.5～1% v/v
合計 200 µL
* アンフ ォライ トはIEF ChipのpH範囲に合わせ
て選んでください。 40％原液のアンフ ォライ トは
1µLを加えて ください。 100倍濃度のアンフ ォライ
トは2µLを加えて ください。
4. SDS-PAGE前のタンパク質の平衡化用にワーキン
グEquilibration Bufferを調製して ください。
試薬 体積 最終濃度
Equilibration
760 µL
Buffer Premix
DTT Solution
40 µL 50 mM
(1M)
合計 800 µL
20424816 Rev 06/21
試料の調製
タンパク質試料を、 ステップ3に従って調製したワーキン
グRehydration solutionに溶解させます。 液体の試料は
ワーキングRehydration solutionで2倍以上に希釈して、
目的のタンパク質濃度にし、 塩濃度を出来るだけ減少さ
せるようにして ください。
塩濃度が高いと等電点電気泳動中に電流が100µAを
超え、 タンパク質分離に影響することがあります。 高塩
濃度の試料は次の内何れかの方法で脱塩を実施して く
ださい。
TCA/アセトン沈
殿処理からのワーキングRehydration solutionによ
る再懸濁または
スピンカラムを用いたワーキング
Rehydration solutionへの交換または
Auto2D®装置を用いた脱塩プロトコル
（詳細はユーザーガイド完全版をご覧ください）
注 ： タンパク質の再懸濁中、 タンパク質を37 °C以上に加
熱しないでください。
試料中のタンパク質を定量して ください。 Auto2Dには0.1
～100µgのタンパク質を導入できます。 タンパク質の適量
は検出方法と試料の複雑さによ って異なります。 次のタン
パク質量をまず試してから、 個々の試料に応じた最適な
アプライ量を決定して ください。
• CBB染色液による検出 ： 50 µg
• 蛍光染色液による検出 ： 10 µg
• 銀染色 ： 5 µg
• 蛍光pre-labeling ： 3 µg
Solution Chipにアプライするタンパク質の量に基づい
て、 タンパク質の分離にS、 M、 Lの何れのレシピを使うか
を決定して ください。
デバイスにアプライ出来る試料の体積は13～15µLです。
試料は必要に応じてワーキングRehydration solutionで
希釈して ください。
38
Auto2D 装置の電源を入れる
®
各国の電源コンセン トに適切な電源コード （同梱） を選択
します。 コードの片端をAuto2D®装置のインレッ トにしっか
りと差し込み、 プラグをコンセン トに差し込みます。
電源スイッチはAuto2D®装置背面のACプラグポートの隣
にあります。 スイッチを上に押し上げて電源を入れます。
アプリケーションは自動的に起動します。 画面から
Auto2D® Plusモードを選択します。
レシピの読み込み
SETTING → RECIPE を選択します。 Recipe Information
（レシピ情報） 画面をタッチします。 Recipe Selectionダ
イアログボックスが表示されます。
"RECIPE NAME" → LOAD → OK → EXIT を選択します。
注 ： 使いたいレシピ名が画面右上に表示されていること
を確認します。
Japanese
20424816 Rev 06/21
チップの準備
PAGE Chip
陰極側
Eチップ
陽極側
1. チップの陽極側にある白いテープをはがします。
2. チップの陰極側にあるプラスチックのカバーを慎
重に取り外します。
3. 陽極と陰極のバッファー溝を蒸留水で優し く すすぎ
ます。 紙ワイパーを用いてチップ外側の液体を拭き
去ります。 この際チップの陰極側に露出している細
長いゲルに傷をつけないように気をつけます。
チップをトレイにセットする
Auto2D®装置のタッチスクリーンで OPEN → OK
を選択します。 トレイが開いたら、 PAGE Chip （水色のライ
ン） を陽極側を手前にして置きます。 Solution Chip Plus
（濃青色のライン） をPAGE Chipの上に、 角の取れた側を
手前にして置きます。
39 Japanese