Siemens Immulite Homocysteine 2000 User Manual page 22

Attenzione: campioni di pazienti che
assumono farmaci contenenti
adenosil-metionina possono
presentare livelli falsamente elevati di
omocisteina.
Risultati su campioni ottenuti da
pazienti che assumono metotrexato,
carbamazepina, fenitoina, ossido di
nitro, ed anti-convulsivi, o 6-triacetato
di azauridina dovrebbero essere
interpretati con cautela poiché queste
sostanze interferiscono con la
determinazione dell'Omocisteina.
Riassunto e spiegazione del
Test
L'omocisteina totale (tHcy) è emersa
come un importante fattore di rischio nella
determinazione delle malattie
3-7,12
cardiovascolari.
che contiene tiolo è prodotto dalla
demitilazione della metionina. L'Hcy quindi
viene utilizzata nella riformazione della
metionina attraverso l'azione della
metionina sintetasi un enzima folato-
dipendente o della cisteina utilizzando il
percorso di transulfurazione B6
1,2
dipendente. L'Hcy nel plasma si
riscontra principalmente in una forma
legata alle proteine, ma sono anche
presenti forme libere, ossidate e
disolforiche.
Livelli molto elevati di tHcy sono riscontrati
in pazienti affetti da omocistinuria, una
malattia genetica rara degli enzimi legata
al metabolismo dell'Hcy.
da omocistinuria presentano
tromboembolia arteriosa, ritardo mentale e
arteriosclerosi precoce.
lievi sono anche associati con livelli
3,4,5
moderati di Hcy.
L'Omocisteina è stata identificata come un
indicatore di malattie cardiovascolari. Una
meta-analisi di 27 studi epidemiologici ha
suggerito che un incremento di 5 µmol/L
nel tHcy potrebbe essere associato con
strane percentuali nelle malattie
coronarico-arteriose (CAD) di 1,6 per gli
uomini e 1,8 per le donne, lo stesso
aumento nel fattore di rischio
rappresentato dall'aumento dello
0,5 mmol/L del colesterolo.
pazienti con patologie renali croniche
complicate da malattie arteriosclerotiche e
cardiovascolari presentano valori elevati di
22
L'Hcy, un aminoacido
1,2,3
Pazienti affetti
1
Difetti genetici più
7
Inoltre
tHcy dovuti all'incapacità da parte dei reni
di eliminare l'Hcy dal sangue.
Principio del Metodo
Dosaggio immunologico competitivo.
L'IMMULITE 2000 effettua un ciclo on-line
di pretrattamento del campione di plasma o
di siero con S-adenosil-L-omocisteina
(SAH) idrolasi ed una soluzione di
ditiotreitolo (DTT) in una provetta di
reazione che non contiene sferette. Dopo
un'incubazione di 30 minuti, il campione
trattato viene trasferito in una seconda
provetta di reazione contenente una
sferetta di polistirene coattata con SAH ed
un anticorpo specifico per la SAH marcato
con fosfatasi alcalina. Durante
un'incubazione di 30 minuti, la SAH
convertita dal pretrattamento del campione
compete con la SAH immobilizzata per
legarsi con l'anticorpo anti-SAH marcato
con fosfatasi alcalina. Il coniugato
enzimatico non legato verrà eliminato
attraverso centrifugazione. Viene aggiunto il
substrato e la procedura continua come
descritto dal Manuale dell'Operatore.
Cicli di Incubazione: 2 × 30 minuti. 2
posizioni test per dosaggio: 1 vassoio per
il trattamento del campione; 1 vassoio di
reazione.
Ciclo 1: Rilascio dell'omocisteina legata
e conversione in SAH.
Ciclo 2: Immunoreazione.
Raccolta del Campione
Preferibilmente utilizzare plasma
eparinizzato ed EDTA, ma è utilizzabile
anche il siero. E' importante separare il
plasma o il siero dalle cellule prima
possibile dopo il prelievo, poichè la sintesi
dell'HCY avviene nei globuli rossi dopo il
prelievo. I campioni devono essere
conservati in ghiaccio tra il prelievo e
la centrifugazione. Notare che la
conservazione nel ghiaccio rende l'utilizzo
dei campioni di siero particolarmente
difficile.
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
I campioni emolizzati posson indicare il
trattamento non idoneo del campione
prima dell'arrivo al laboratorio; per questo
motivo, i risultati devono essere
interpretati con prudenza.
IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
1,2,3